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故事发生在公元前480年，精明强悍的波斯士兵在波斯国王薛西斯一世（大卫·法拉尔 David Farrar 饰）的带领下正来势汹汹地朝希腊进军，斯巴达城国王列奥尼达斯（理查德·伊甘 Richard Egan 饰）带领三百勇士和四千联军镇守最前线温泉关。叛徒的出卖让列奥尼达斯的军队成为了瓮中之鳖，情急之下，列奥尼达斯命令联军撤退，自己带领着三百勇士孤军奋战，死守温泉关。
面对敌方无边无际的列队，列奥尼达斯和他的勇士们早已经知道了此战的结局，然而，他们并没有胆怯，反而因为势单力敌而燃起了格外高涨的气势。经过两天两夜的殊死搏斗，波斯大军伤亡惨重，而斯巴达三百勇士亦长眠于温泉关之中。